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western与变形胶跑蛋白的区别 纯化目的蛋白,跑胶之后什么东西都没有,连一条杂带...

western与变形胶跑蛋白的区别 纯化目的蛋白,跑胶之后什么东西都没有,连一条杂带... 如果只考虑到电泳的过程的话,WB的电泳分离和变性胶跑蛋白的电泳分离基本是完全一样的。 不同之处在于,单纯变性胶跑完蛋白以后,就是直接考马斯亮蓝染色,脱色观察样品中蛋白的情况。这时看到的是全蛋白。 而Western在电泳结束后,需要将凝胶上

蛋白电泳胶跑得不好

最近跑蛋白质的胶,跑了十分钟左右电压为100V出现了条带融合的情况,也是不是发生在从压缩胶要进分离胶的时候? 有没有发现“漏样”的现象?就是某一个或几个孔的样品在分离胶和压缩胶交界处漏了,可以看到横向的一条线 不管是不是这种情况,我建议你把配胶的buffer换掉,如果还不行,上样缓冲液和lysis buffer都要换

用了12%的胶跑出来大分子量蛋白,有补救的方法吗

回 1、10%和12%胶的差别: 根据你目的蛋白分子量而定,如果说是分子量较大的蛋白(60KD以上),可以用10%的胶,分子量在60~30KD之间的可以用12%的胶,低于30KD的我一般都是用15%的胶了。主要在于指示线刚好跑出胶底的时候,你的目的蛋白能

western protein中跑胶是什么意思

要做western,第一个步骤就是用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)来分离蛋白,这个过程就是跑胶。因为蛋白是混合物,通过凝胶电泳(跑胶)以后,可以把不同分子量大小的蛋白分开,分子量大的蛋白涌动的慢,分子量小的泳动得快,就在胶上显出条带。然后

小分子蛋白用20%分离胶可以跑出来吗

胶浓度与蛋白大小,是经过前人多次电泳的经验总结在最佳的电泳条件下,能得到比较好的分离效果和比较好看的条带 如果胶浓度够大,蛋白条带会比较细一些,但电泳速度比较慢,大的片段可能分不开 10%能不能用得看你的情况了如果只是一个条带,用10%

蛋白跑胶时为什么要进行一抗和二抗

这是蛋白质的免疫印迹法研究蛋白质。加入的一抗作为抗体与膜上的抗原蛋白结合,再加入酶偶联或放射性同位素标记的二抗与一抗结合后,通过显色或放射自显影发检测凝胶中的蛋白质。

纯化目的蛋白,跑胶之后什么东西都没有,连一条杂带...

首先,纯化之前的溶液里面有目的蛋白,也有杂带,纯化是手收集的溶液里SDS-PAGE条带什么都没有。是指洗脱样品部分什么都没有,还是包括流穿样品什么都没有? 如果是仅仅洗脱样品什么都没有,那么就是样品没有结合His柱的问题 如果是流穿样品和洗脱样品都没有条带,那么可能就是收集的时候出现了问题。没有收集到有蛋

为什么蛋白SDS-PAGE胶跑成一个哭脸的样子

条带弯曲么,有两种可能: 1、电泳缓冲液不干净; 2、电压引起的边缘效应;

western与变形胶跑蛋白的区别

如果只考虑到电泳的过程的话,WB的电泳分离和变性胶跑蛋白的电泳分离基本是完全一样的。 不同之处在于,单纯变性胶跑完蛋白以后,就是直接考马斯亮蓝染色,脱色观察样品中蛋白的情况。这时看到的是全蛋白。 而Western在电泳结束后,需要将凝胶上

我的蛋白分子量150-160kd的,我应该用多少的分离胶

15%的胶应该是没问题的,跑的时间长一些,距离长一些就能跑开。上样量得看你蛋白的表达量,一般15-30μg就应该没有问题,不过选用β-actin做对照,建议用另一块12%的胶跑β-actin,这样可以使目的蛋白和对照条带宽度大概一致。

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